Oznaczanie zawartości witaminy C
Oznaczanie witaminy C
Oznaczanie bezpośredniej redukcyjności metodą Tillmansa
Zasada metody: Oznaczenie polega na redukcji barwnego roztworu 2,6-dichlorofenoloindofenolu do bezbarwnego leukozwiązku przez kwaśny roztwór kwasu askorbinowego.
Schemat rozcieńczeń:
100 ml
↑ x10
10 ml → 100 ml
↓ x20
5 ml R = 10*20 =200
Vśl = 0,12 ml
Vwł = 0,98 ml
T = 0,12 [mg/ml]
V = Vwł – Vśl = 0,98 ml – 0,12 ml = 0,86 ml
0,12 mg kwasu ——– 1 ml (2,6- dichlorofenoloindofenolu)
x ——– 0,86 ml
x = 0,1032 mg
Bezpośrednia redukcyjność = 0,1032 mg * R = 0,1032 mg *200 =20,64 mg%
Wnioski: Na wynik miareczkowania roztworów witaminy C (bezpośrednia redukcyjność), oprócz kwasu L-askorbinowego mają wpływ również reduktony białkowe i reduktony cukrowe. Obecność tych związków o właściwościach silnie redukujących powoduje szybszą redukcję barwnika Tillmansa. Punkt równowagowego nasycenia uzyskuje się przy mniejszej objętości barwnika. Zawartość witaminy C w soku z kapusty wyznaczona na ćwiczeniu wynosi 20,64 mg%, wynik ten różni się od rzeczywistej zawartości wit. C w soku z kapusty kiszonej, która powinna wynosić 30 mg%. Oprócz wpływu innych substancji redukujących, na wynik może wpływać również niedokładność miareczkowania.
Oznaczanie sumy kwasu L-askorbinowego i kwasu L-dehydroaskorbinowego (ogólna redukcyjność) metodą Pijanowskiego
Zasada metody: Oznaczenie polega na redukcji kwasu L-dehydroaskorbinowego do kwasu L-askorbinowego przez roztwór siarczku sodowego, straceniu nadmiaru siarczku roztworem chlorku rtęci i oznaczeniu ogólnej redukcyjności w produkcie za pomocą miareczkowania 2,6-dichlorofenoloindofenolem.
Schemat rozcieńczeń
100 ml
↑ x10
10 ml → 100 ml
↓ x10
10 ml → 20 ml
↓ x2
10 ml R = 10*10*2 = 200
V = 0,72 ml
0,12 mg kw. ——– 1 ml barwnika
x ——– 0,72 ml barwnika
x =0,0864 mg
Ogólna redukcyjność = 0,0864 mg *200 = 17,28 mg%
Wnioski: Podczas redukcji kwasu L-dehydroaskorbinowego do kwasu L-askorbinowego straceniu ulegają reduktony białkowe. Na ogólną redukcyjność ma wpływ obecność kwasu L-askorbinowego, L-dehydroaskorbinowego i reduktonów cukrowych. Ogólna redukcyjność wyznaczona na ćwiczeniu wynosi 17,28 mg%. Wynik ten jest niższy od wyniku bezpośredniej redukcyjności (20,64 mg%), świadczy to o tym, że w roztworze więcej jest reduktonów białkowych niż kwasu L-dehydroaskorbinowego.
Oznaczanie witaminy C w soku z czarnej porzeczki
Zasada metody: w metodzie wykorzystuje się fakt, że w rozpuszczalnikach organicznych rozpuszcza się odczynnik Tillmansa, a nie rozpuszczają się barwniki antocyjanowe. Po osiągnięciu końcowego punktu miareczkowania nadmiarowa kropla roztworu barwnika przechodzi do warstwy rozpuszczalnika barwiąc go na różowo.
Schemat rozcieńczeń.
100 ml
↑ x20
5 ml → 100 ml
↓ x50
2 ml R = 20*50 =1000
V = 0,8 ml
0,12 mg kw. askor.——– 1 ml barwnika
x ——– 0,8 ml
x =0,096 mg
wit. C = 0,096 mg * 1000 = 96 mg %
Wnioski: Zawartość witaminy C w soku z czarnej porzeczki powinna wynosić od 100-200 mg%. Wynik otrzymany na ćwiczeniu (96 mg%) nie mieści się w tym przedziale, jest to spowodowane obecnością w roztworze oprócz kw. askorbinowego również reduktonów białkowych i cukrowych, które wpływają na redukcję barwnika.
Metodyka obliczania niepewności pomiarowej: